目的觀察不同部位注射腫瘤壞死因子α(TNFα)反義寡核苷酸對實驗性單皰病毒性視網膜炎的影響。方法BALB/c小鼠右眼前房注射單純皰疹病毒1(HSV1)，同時左眼結膜下或玻璃體注射TNFαASON治療，觀察其組織學變化并測定小鼠眼的TNFα含量，比較2種治療方式的效果。結果試驗組小鼠眼TNFα發生視網膜炎的幾率及嚴重度明顯減少;玻璃體注射組TNFα含量更低。結論采用作用于TNFα的反義寡核苷酸局部治療小鼠單皰病毒性視網膜炎,能明顯降低感染小鼠眼內細胞因子TNFα的含量,減輕眼內視網膜炎癥反應。結膜下注射給藥也許是更好的方法。

視網膜炎;反義寡核苷酸;腫瘤壞死因子;單純皰疹病毒Ⅰ型

　　ABSTRACT：ObjectiveToinvestigatetheeffectoflocaltreatmentwithantisenseoligonucleotides(ASON)targetingtumornecrosisfactorα(TNFα)atdifferentpositionsonexperimentalherpessimplexvirus(HSV)1retinitis.MethodsAfterHSV1(KOS)wasinjectedintherightanteriorchamber(AC)inBALB/cmice,thelefteyesweretreatedwithTNFαASONbysubconjunctivalorvitreousinjection,andthecourseofcontralateralretinitiswasevaluated.TheocularTNFαcontentwasquantifiedbyELISA.ResultsIntheTNFαASONtreatedeyes,TNFαexpressionandtheincidenceandseverityofretinitiswerereduced.Theeffectofdifferentinjectionsiteswasuncertain.ConclusionASONcanreduceTNFαcontentandalleviatetheinflammatoryreaction.Subconjunctivalinjectionmaybebetter.

　　KEYWORDS：Retinitis;Antisenseoligonucleotides;Tumornecrosisfactor;Herpessimplexvirus1葡萄膜炎是眼科的常見疾病之一，其發病機制尚不完全清楚，病理特征是血房水屏障破壞,蛋白及炎癥細胞滲出于血管外以及虹膜睫狀體的炎性浸潤[1]。近來研究表明腫瘤壞死因子(tumornecrosisfacror,TNF)在炎癥反應中起重要作用[2]。為了解TNFα在葡萄膜炎發病機制中的可能作用,我們以反義寡核苷酸(ASON)局部治療HSVⅠ誘導產生的葡萄膜炎動物模型,并探討ASON不同注藥方式對葡萄膜炎中TNFα含量的影響。

　　1材料與方法

　　1.1建立模型

　　采用BALB/c雌性小鼠，年齡6至8周。動物腹腔麻醉后，右眼前房接種含1×105菌斑形成單位的HSV1磷酸鹽緩沖液2μl。建立單皰病毒性急性視網膜炎模型。

　　1.2試驗設計

　　59只小鼠按隨機數字表法隨機分為對照組(13只)和試驗組(包括結膜下注射組和玻璃體注射組，每組23只)。分別于HSV1感染前1d、感染后1、4d在手術顯微鏡下,左眼球結膜下或玻璃體腔注射作用于TNFα的ASON約5μl。對照組小鼠注射磷酸鹽緩沖液。

　　1.3臨床與組織學檢查

　　小鼠注射感染后，雙目手術顯微鏡觀察小鼠雙眼眼部改變如前房炎性反應、瞳孔擴大、虹膜血管擴張以及眼底白色反光等癥狀。

　　第8日處死所有小鼠，每組取13只鼠左眼固定、脫水和石蠟包埋。切片成5μm后HE染色。400倍光學顯微鏡觀察在睫狀體、視網膜、脈絡膜的炎癥細胞浸潤。按視網膜炎的嚴重程度從0到2+分級：0，沒有視網膜炎;1+，僅有內1/3的視網膜有炎癥細胞浸潤，病變累計范圍小于1/2視網膜;2+，炎癥細胞浸潤視網膜全層，病變累計范圍大于1/2視網膜。