目的研究澤瀉提取物不同部分的自由基清除活性。方法采用有機溶劑萃取法和大孔樹脂洗脫法將澤瀉總提取物分為石油醚部分、醋酸乙酯部分、正丁醇部分、乙醇部分、乙醇洗脫部分和水提部分。分別考察對羥自由基(·OH)、超氧陰離子自由基(O2-·)、DPPH自由基(DPPH·)和H2O2的清除效果。結果澤瀉正丁醇部分在清除O2-·和H2O2能力較強，醋酸乙酯部分清除DPPH·較強，而澤瀉水提部分清除·OH自由基能力較強，而且效果好于維生素C。結論澤瀉正丁醇部分、醋酸乙酯部分和水提部分清除自由基能力強。
澤瀉DPPH超氧陰離子自由基羥自由基
Abstract：ObjectiveToinvestigatefreeradicalscavengingactivityinvitroofdifferentpolarityfractionsofextractsfromAlismaorientalis.MethodsSixdifferentfractionswereobtainedfromtheextractofA.orientalisbyusingdifferentpolaritiesofsolvents,suchaspetroleumether,ethylacetate,n-butanol,ethanol,water,andmacroporousresin.Accordingtoscavengingactivitiesforhydroxylradical(·OH),superoxidizedradical(O2-·),1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH·)radicalandH2O2,freeradicalscavengingactivitiesofdifferentpolarityfractionswerecompared.Resultsn-butanolfractionofA.OrientalishadbetterscavengingabilitythanothersforO2-·andH2O2,ethylacetatefractionofA.OrientalishadbetterscavengingabilitythanothersforDPPH·,waterfractionofA.Orientalishadbetterscavengingabilitythanothersfor·OH,includingVitaminC.ConclusionThefractionsofethylacetate,n-butanolandwaterhavestrongfreeradicalscavengingactivities.
Keywords：Alismaorientalis;DPPH;Superoxidefreeradical;Hydroxylradical
澤瀉系澤瀉科植物澤瀉Alismaorientalis(Sam.)Juzep.的干燥塊莖,在歷代本草和《中國藥典》中均有收載。現代藥效學研究表明,澤瀉具有利尿消腫、抗脂肪肝、降血脂等作用［1～3］。有研究報道，澤瀉總提取物能降低大鼠和兔血液中脂質過氧化產物MDA的含量，提高血液中抗氧化酶SOD活力，對于氧化應激/脂質過氧化損傷具有一定保護作用［4］。為了明確澤瀉抗氧化的作用部位，筆者采用有機溶劑萃取法和大孔樹脂洗脫法，將澤瀉的總提取物分為石油醚部分、醋酸乙酯部分、正丁醇部分、乙醇部分、乙醇洗脫部分和水提取部分，分別對提取物的各部分進行了清除羥自由基、超氧陰離子自由基、DPPH·自由基和H2O2效果的研究，為進一步探討澤瀉提取物的抗氧化性能提供依據。
1器材
澤瀉，購自江西廣昌,按中藥炮制規范得到飲片,再粉碎得到20目顆粒；乙醇、石油醚、正丁醇、醋酸乙酯、鄰苯三酚、三羥甲基氨基甲烷(Tris)、HCl、Vc、FeSO4、雙氧水、水楊酸、DPPH·均為分析純。
T6型紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限公司），N-1001型旋轉蒸發儀（東京理化公司），TDL-5型低速臺式離心機（上海安亭科學儀器廠），AR5120型電子天平（美國奧豪斯公司）。
2方法
2.1澤瀉提取物的制備取澤瀉顆粒，去離子水提取，濃縮，提取液乙醇醇沉，靜置24h，5000r/min離心10min,取上清液，濃縮到原體積的1/4后，分別用石油醚、醋酸乙酯和正丁醇萃取。最后將萃取水相過大孔樹脂，用95%乙醇洗脫，分別得到澤瀉水提部分、醇提部分、石油醚部分、醋酸乙酯部分、正丁醇部分和乙醇洗脫部分6個部分，將各部分濃縮后，配成一定濃度溶液，放置備用。
2.2超氧陰離子自由基［5］的清除鄰苯三酚在弱堿條件下發生自氧化，產生O2-·。O2-·清除劑能使鄰苯三酚自氧化產物在325nm處的吸收峰減弱，通過吸光值A325的變化率計算對O2-·的清除能力。取4ml0.05mol/LTris-HCl緩沖液（pH8.2），置于25℃水浴中預熱20min，分別加入1ml待測液和1ml25mmol/L鄰苯三酚溶液，混勻后于25℃水浴中反應5min，加入0.1ml8%的HCl終止反應，在325nm處測A值，以1ml蒸餾水代替待測液作空白試驗。以維生素C作陽性對照。
清除率(P)=［A3-(A1-A2)］/A3×100%
其中A1為某濃度的澤瀉提取物吸光值，A2不加入鄰苯三酚無顯色時的吸光值，A3不加澤瀉提取物的吸光值。
2.3羥自由基［6］的清除利用Fe2+與H2O2混合產生·OH，以·OH氧化水楊酸所得產物的吸光值表示·OH的多少，吸光值越大，·OH越多。反應試管中加入0.5ml9mmol/LFeSO4，0.5ml9mmol/L水楊酸-乙醇溶液及1ml不同濃度的澤瀉提取物，最后加5ml9mmol/LH2O2啟動反應。37℃溫浴1h，于510nm處測A值。以維生素C作陽性對照。
清除率(P)=［A3-(A1-A2)］/A3×100%
其中A3為對照不加澤瀉提取物的吸光值；A1為某濃度澤瀉提取物的吸光值；A2為無顯色劑時的該濃度的本底值。
2.4DPPH·自由基［7］的清除DPPH·是一種穩定的自由基，與抗氧化劑發生反應，提供H·被還原，顏色由深紫色變為淡黃色，當有自由基清除劑存在時，DPPH的單電子被配對而使顏色變淺，變淺的程度與配對電子數成化學計量關系，因此，我們可以通過吸光度的測定來檢測自由基的清除情況,從而評價試驗樣品的抗氧化能力。按照Larrauri方法，2ml新配制的20mmol/LDPPH·溶液中加入2ml不同濃度的澤瀉提取物，室溫暗光下反應30min，在517nm處測定A值，以維生素C作陽性對照。
清除率(P)=［A3-(A1-A2)］/A3×100%，其中A1為加入澤瀉提取物和DPPH·時的吸光值；A2為加入澤瀉提取物但不加入DPPH·時的吸光值；A3為不加澤瀉提取物，加入DPPH·時的吸光值。